时间分辨荧光分析法( Time resolved fluoroisnmunoassay,TRFIA )是近几年发展起来的一种微量分析方法,是目前最灵敏的微量分析技术 , 其灵敏度高达 10 -19 ,较放射免疫分析( RIA )高出 3 个数量级。
时间分辨荧光分析法( TRFIA )实际上是在荧光分析( FIA )的基础上发展起来的,它是一种特殊的荧光分析。荧光分析的利用了荧光的波长与其激发波长的巨大差异克服了普通紫外-可见分光分析法中杂色光的影响,同时,荧光分析与普通分光不同,光电接受器与激发光不在同一直线上,激发光不能直接到达光电接受器,从而大幅度的提高了光学分析的灵敏度。但是,当进行超微量分析的时候,激发光的杂散光的影响就显得严重了。因此,解决激发光的杂散光的影响成了提高灵敏度的瓶颈。
解决杂散光影响的最好方法当然是测量时没有激发光的存在。但普通的荧光标志物荧光寿命非常短,激发光消失,荧光也消失。不过有非常少的稀土金属( Eu 、 Tb 、 Sm 、 Dy )的荧光寿命较长,可达 1 - 2ms ,能够满足测量要求,因此而产生了时间分辨荧光分析法,即使用长效荧光标记物,在关闭激发光后再测定荧光强度的分析方法。
TRFIA 所用的标记物是镧系元素螯合物,利用这类荧光物质荧光寿命长及 Stokes 位移大的特点,通过波长和时间两种分辨技术,有效排除了非特异本底荧光的干扰,具有灵敏度高,标记物制备简单,稳定性好,标准曲线线性范围宽,操作方便,成为最有发展前途的超微量分析技术和当前标记免疫分析发展到新阶段的代表。
随着检验医学的发展,对微量、超微量的测定会越来越多,同时 RIA 的污染问题会越来越被重视,因此,时间分辨荧光分析法( TRFIA )具有越来越大的应用空间。 |