时间分辨免疫荧光分析使用的镧系复合物的特点
时间分辨免疫荧光分析使用的镧系复合物的三个主要优势:
(1)最大的Stokes位移,荧光物质激发光谱曲线的最大吸收波长和发射光谱的最大发射波长之间的差,称为Stokes位移。在内部转移期间,由于能量的分配,内系统的交叉,分子内部的能量转移,使从镧系复合物发出的量子与激发光有明显的不同,Stokes位移达200nm,很容易分辨激发光和发射光,从而排除激发光干扰。而普通荧光物质荧光光谱的Stokes位移只有几十纳米,激发光谱和发射光谱通常有部分重叠,互相干扰严重。镧系复合物的这种特性可避免激发光谱和荧光发射光谱以及生物基质发射的光谱重合(见图1.2)。
            
Figure1.2 Uniquefluorescenceproperties of lanthanides, large Stokes’shift
(2)镧系元素与普通的荧光团比较,镧系元素离子螯合物荧光的衰变时间(decaytime)长(10—2000us),为传统荧光的103~106倍(见图1.3)。表1列出了稀土离子及一些常见荧光物质的荧光寿命。镧系元素的荧光不仅强度高,而且半衰期也很长,介于10~1000us之间。这样,用时间分辨荧光仪测量Eu3+螯合物的荧光时,在脉冲光源激发之后,可以适当的延迟一段时间,待血清、容器、样品管和其他成分的短半衰期荧光衰变后再测量,这时就只存Eu3+标记物的特异性荧光,即通过时间分辨,极大地降低了本底荧光,实现了高信噪比,这是TRFIA高灵敏度和低干扰的原因之一。如果在使用链霉亲合素-生物素系统,可更好地降低非特异性荧光的干扰;
                               
Figure1.3 Uniquefluorescenceproperties of lanthanides, long fluorescence decaytimes
(3)镧系螯合物激发光光谱较宽,最大激发波长在300~500nm,可通过增加激发光能量来提高灵敏度。而它的发射光谱带(line-likebands)很窄,甚至不到10nm,可采用只允许发射荧光通过的滤光片,进一步降低本底荧光,镧系复合物虽然量子产量较常规的荧光团为低的主要波段的荧光强度是非常强的,原因在于能量的转移大部分是通过这个波段发射的。狭窄的发射波段为多次分析成为可能,更不必担心光谱重叠(见图1.4)
                              
Figure1.4 The wavelength of thefluorescencelightnarrow emission band
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